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豬ELISA試劑盒在實際測定操作中要注意哪些問題?

  豬ELISA試劑盒具有敏感性高,特異性強,快速等特點,目前廣泛應用於農獸藥、真菌殘留檢測,該方法從加樣、洗板、顯色到讀數步驟繁多,其中任何一步控製不好都可能影響檢測結果的準確性。因此,在實際測定操作中要注意以下幾點。
  1.試劑盒回溫
  ELISA檢測試劑盒為冷藏(2℃-8℃)保存。從冰箱拿出來後,先不要急於打開試劑盒,要等試劑盒的溫度平衡至室溫且試劑盒盒表麵無冷凝水,檢測所用的試劑需充分混勻且徹底溶解後再用,提前1~2小時取出試劑盒,放在室溫中;或在預設25℃恒溫培養箱中平衡30分鍾~60分鍾。
  2.環境溫度的控製
  1)實驗室應配備溫濕度表,且確保定期計量。
  2)根據天氣情況設定實驗室空調製冷或加溫功能,待室溫穩定且無幹擾的條件下再開始檢測流程。
  3)選用帶溫控裝置的孵育儀器,如恒溫孵育器、恒溫培養箱、多功能酶標儀等。注意要提前開啟預熱。
  豬ELISA試劑盒的操作方法:
  1.包被:在每個聚苯乙烯板的反應孔中加0.1ml,4℃過夜。次日,棄去孔內溶液,用洗滌緩衝液洗3次,每次3分鍾。
  2.加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.1ml於上述已包被之反應孔中,置37℃孵育1小時,然後洗滌。
  3.加酶標抗體:於各反應孔中,加入新鮮稀釋的酶標抗體0.1ml。
  4.加底物液顯色:於各反應孔中加入底物溶液0.1ml,37℃10~30分鍾。
  5.終止反應:於各反應孔中加入酸0.05ml。
  6.結果判定:豬ELISA試劑盒可於白色背景上,直接用肉眼觀察結果:反應孔內顏色越深,陽性程度越強,陰性反應為無色或較淺,依據所呈顏色的深淺。
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