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降鈣素ELISA試劑盒測定樣品中人降鈣素原水平

  降鈣素ELISA試劑盒是一種由32個氨基酸組成的線性多肽激素,在人體內,主要由甲狀腺的濾泡旁細胞(也稱為C細胞)產生,在其他動物中,由末咽體產生,它的作用是降低血鈣(Ca2+),抵抗甲狀旁腺激素(PTH),在魚類、爬行動物、鳥類和哺乳動物中發現了降鈣素。
  降鈣素是通過蛋白水解切割較大的前多肽原形成,該前多肽原是基因的產物,在功能上它是PTH和維生素D3的拮抗劑,高濃度的降鈣素可能通過對腎小管的作用增加尿鈣和磷酸鹽的排泄,進而導致明顯的低鈣血症。在骨骼的保護中,降鈣素避免鈣動員過程中(如懷孕,尤其是哺乳期)骨骼鈣流失,此外,降鈣素抑製大鼠和猴子的攝食,可能具有調節攝食和食欲中樞神經係統的作用。
  每孔加入250μl檢測緩衝液,室溫孵育2小時,或者2 - 8°C封閉過夜,封閉後的酶標板可置於2-8°C貯存1個星期,或者-20°C貯存2個月,封閉後的酶標板若要立即使用,請先洗滌兩次,然後加入樣本。撕掉封板膜、棄掉孔中液體,每孔加入約300μ的洗液,洗滌6次,每次洗完都要徹底移除孔中溶液,條件允許的話,加入洗液後300轉/分鍾振蕩60秒,注意請勿接觸酶標板的表麵。每次洗滌,在吸水紙上拍幹多餘的洗液,洗板完成後請立即使用酶標板,或者顛倒置於濕的吸水紙上不得超過15分鍾,不要讓酶標板幹燥。
  降鈣素ELISA試劑盒采用雙抗體夾心法酶聯免疫吸附檢測技術,測定樣品中人降鈣素原水平,向預先包被了抗人降鈣素原抗體的酶標孔中,加入標準品和樣本,溫育後,加入生物素標記的抗降鈣素原抗體,再與HRP標記的鏈黴親和素結合,形成免疫複合物,再經過溫育和洗滌,去除未結合的酶,然後加入顯色底物TMB,產生藍色,並在酸的作用下轉化成黃色,在450 nm處測定反應孔樣品吸光度值,樣本中的人降鈣素原濃度與OD值成正比,通過繪製標準曲線計算出樣本中人降鈣素原的濃度。
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