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等孢球蟲通用PCR檢測試劑盒準備試劑與收集血樣

等孢球蟲通用PCR檢測試劑盒準備試劑與收集血樣:
雙重核酸試劑盒(熒光PCR法) 1.  收集標本:血清、血漿(EDTA 、檸檬酸鹽、肝素抗凝)、細胞培養上清液、組織勻漿等盡早檢測, 2-8 ℃ 保存48 小時;更長時間須冷凍( -20   ℃或 -70   ℃ )保存,避免反複凍融。
2.  標準品液配製:使用前加入0.5ml 蒸餾水 混勻,配成 120 0ng/ml 的溶液 。 設標準 管 8 管,管加標本稀釋液 900ul ,第二至第八管加入標本稀釋液 500ul 。在管中加入 120 0ng/ml 的標準品溶液 100ul 混勻後用加樣器吸出 500ul ,移至第二管 。如此反複作對倍稀釋,從第七 管 中吸出 500ul 棄去。第八 管 為空白對照。
3.  10× 標本稀釋液用蒸餾水作 1: 1 0 倍稀釋( 示例: 1ml濃稀釋液 +9ml 蒸餾水)。
4.  洗滌液:用重蒸水 1:20 稀釋(示例:1ml 濃縮洗滌液加入 19ml 的重蒸水)
檢測程序:
1.  加樣:每孔各加入標準品或待測樣品 100ul ,將反應板充分混勻後置 37 ℃ 120 分鍾。
2.  洗板:用洗滌液將反應板充分洗滌 4-6 次,向濾紙上印幹。
3.  每孔中加入抗體工作液10 0ul 。將反應板充分混勻後置 37 ℃ 6 0 分鍾。
4.  洗板:同前。
5.  每孔加酶標抗體工作液100ul 。將反應板置 37 ℃ 3 0 分鍾。
6.  洗板:同前。
7.  每孔加入底物工作液100ul ,置 37   ℃ 暗處反應15 分鍾。
8.  每孔加入100ul 終止液混勻。
9.  30分鍾內用酶標儀在 45 0 nm 處測 吸光值。
 非特異產物及電泳呈塗布狀
1.Mg2 濃度
2.調整引物、模板、聚合酶的用量
3.適當減少循環數
4.適當提高退火溫度,縮短退火或延伸時間

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