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佛手染料法PCR鑒定試劑盒陽性對照有目的條帶幾個問題

佛手染料法PCR鑒定試劑盒陽性對照有目的條帶,待測樣本無條帶或條帶弱的幾個問題:
1、不當儲存或長期儲存引起試劑活性喪失。
2、加入組織裂解液過量。
3、樣本裂解混合液保存不當或保存時間過久,DNA基因組已經降解。
4、模板加入量不適合。
5、PCR循環數不足。
解決方法:
1、使用新鮮的試劑。
2、增大反應體係,或減少裂解液的用量。
3、裂解混合液液可在4℃保存2-3天,盡量使用新製備的裂解液混合液進行PCR。
4、在反應體係10-20%範圍內優化模板加入量。反應效性能較差時,可以降模板濃度調節到低於10%的範圍。
5、適當增加PCR的循環數,推薦在35-40循環為佳。因為模板複雜,一般PCR反應要比用純化的 DNA模板多5-10個循環為佳。

 

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